HE染色法

蘇木精-伊紅染色法簡稱HE染色法，是最常用的染色方法。蘇木精（hematoxylin）是陽離子染料，能夠將細胞核內的嗜堿性物質染成藍紫色。伊紅（eosin）是陰離子染料，能夠將細胞質和膠原纖維等染成粉紅色。

一張做工精良的HE切片是病理醫生得以做出正確診斷的關鍵。HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛采用的常規染色方法。切片質量的好壞，可直接影響疾病診斷的及時與準確性。

技術原理

1、細胞核染色原理蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

2、細胞漿染色原理細胞漿內主要成分是蛋白質，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系，當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時，大于蛋白質的等電點pH值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時胞核也被染色，核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。

3、分化作用染色后，用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結構，使組織與色素分離而褪色。經蘇木精染色后，必須用0.5%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去，在進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此，在HE染色中分化是極為關鍵的一步。

4、返藍作用分化之后，蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態，呈紅色，在堿性條件下處于藍色離子狀態，呈藍色。組織切片經0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化，再用弱堿性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細胞核呈現藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。
 
實驗步驟

實驗結果展示：

注意事項

1、pH值如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2、分色時間分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色后再行分色。

3、酒精脫水應徹底切片經酒精脫水后，入二甲苯時可出現白色不透明狀態，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。

4、避免切片干燥在染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經元形態。

5、避免切片污染出現切片污染，污染物遮蓋該部位的細胞或組織難以觀察期形態改變。應定期過濾各種染液和試劑以避免其中的沉淀物所引起的污染。

6、避免脫蠟不完全冬季室溫低時（14℃以下），二甲苯應在水浴缸中適當加溫到30℃后再脫蠟，以避免因脫蠟不完全引起的染色不均勻呈霧化狀態。

7、封片注意事項最后封固時，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。
 
 
送樣運輸要求：

1、樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。

2、切勿固定時間過長，切勿冷凍結冰。