應用簡介
脊髓損傷的修復與治療是醫學界面臨的一大難題。脊髓損傷模型種類繁多,各有其優缺點,在應用時應根據具體實驗研究目的和條件作出科學的選擇。目前,國內脊髓損傷實驗研究最常選用的動物是大白鼠、兔、貓、犬。體型較大的動物在實際的實驗操作中存在如下不利因素:手術操作步驟相對復雜,切口容易感染,容易死于術后的脊髓損傷并發癥,一定程度影響了實驗結果。大鼠作為一種價格便宜、容易飼養的動物,作為制作脊髓損傷模型還有如下特點:再現性好;臨床相關性好;與人類高度同源性;重復性強;適應范圍廣;操作簡單;死亡率低等。常見的脊髓損傷動物模型有脊髓撞擊損傷模型、脊髓壓迫損傷模型、脊髓切割損傷模型、切除型脊髓損傷模型等。
實驗方法
一、Allen’s脊髓損傷模型建立
①取成年雌性SD大鼠(220~250g),用2%戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內注射麻醉、固定(包括頭部)。備皮消毒后,在無菌條件下切開皮膚、淺筋膜。
②用器械沿T8~T10兩側棘突順豎脊肌群走向鈍性分離肌肉和韌帶,清晰暴露T9棘突和椎弓,有齒鑷輕提T9棘突,用眼科剪沿T9、T10椎弓間隙輕輕咬開椎弓根部,并逐漸咬除T9椎弓,暴露T10段脊髓。
③采用改良的Allen裝置,打擊裝置整合于立體定位儀上,將一打擊面直徑為3mm圓形薄銅墊片(面積7.075mm2,重量0.1g)置于T10節段脊髓表面,以重10g的砝碼自5cm高處自由墜落打擊該墊片,致傷量為50g·cm,造成T10節段脊髓的沖擊傷。
④撞擊成功后會發現大鼠后肢伸展,尾巴左右搖晃。手術結束,再次消毒,逐層縫合肌肉、皮膚。假手術組4只僅行棘突和椎板切除,不損傷脊髓,大鼠無行為學及后肢運動功能改變。
⑤術后動物被放在30℃的加熱墊上復蘇,待清醒后室溫飼養,自由飲食。截癱大鼠膀胱區人工按壓排尿,每天2次,直到膀胱排空功能恢復,防止并發癥。
二、切除型脊髓損傷模型
①室溫條件下以2%戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內注射麻醉兩組大鼠,外科備皮,固定于鼠板,外科消毒,鋪無菌巾;
②沿背正中線切開背部皮膚,銳性分離筋膜、椎旁肌肉,咬除T8-9椎板,暴露T7脊髓節段,在手術顯微鏡下,沿脊髓后正中線剪開硬脊膜,并固定在臨近肌肉組織上。
③切割脊髓損傷模型組使用10號刀片在顯露的脊髓中間位置橫向切斷脊髓,刀片要觸及椎管前壁和側壁骨面,一次性切割脊髓,但并不移除組織,然后逢合肌肉,皮膚;
④切除脊髓損傷模型組使用顯微外科剪刀將一段長約5 mm脊髓全部剪斷,然后用吸引器于軟膜下吸斷未橫斷的脊髓組織,用10號刀片反復刮脊柱內表面以去除殘留組織與纖維,由與手術無關人員確認此段無組織殘留,術中采用壓迫和電凝進行止血,8-0顯微縫合線縫合硬脊膜,然后逢合肌肉,皮膚。
⑤術后處理:術后嚴密觀察及記錄動物精神狀態、飲食、尿便、肢體水腫、壓瘡、泌尿系統感染等情況。給予青霉素20×104 U/次,2次/d,按摩膀胱3次/d,直到膀胱排尿反射功能基本恢復,防止泌尿系統及其他并發癥的發生。
術后護理操作方法:實驗人員雙手戴上棉布厚手套,左手以麻醉大鼠的手法抓取固定大鼠(但是需注意不要過度用力,以免擠壓到背部傷口或大鼠胸腔),右手手掌托住大鼠腹背部,右手食指摸索找到膀胱,適當用力擠壓膀胱,尿液就會從尿道流出。術后需每天排尿一次,并使用75%酒精在尿道附近噴灑消毒,衛生紙擦拭干凈尿道周圍污漬。如果護理情況良好,一般術后一周,大鼠會恢復自主排尿功能。前期護理過程中,大鼠可能會尿血,屬正常現象。



